323lab-HJ12-QK192
zhanglab 合成仪注意事项
仅供学习参考，谢谢配合
- 合成仪的最佳条件：温度最佳22℃，湿度不超过40%。实际上温度和湿度越低越好。
- 在四楼工作时注意垃圾分类，生物垃圾归黄，普通垃圾直接扔外面垃圾桶。
本文参考资料
基本概念
DNA固相合成原理
与自然界DNA合成方向不同，DNA固相合成方向为3’-5’
过程中需要用的试剂有：
- 普通单体：A、T、C、G等
- 特殊单体：BHQ、Cy3、EdU、Cy5、Biotin氨基修饰单体
- 大瓶试剂，共6瓶（作用见上面的原理图）：DEB、ACT、CAPA、CAPB、OXI、WASH
- 高纯度氮气气瓶
开关仪器与调节气压
开机时
- 先开合成仪：12通道和192的开关都在机器右侧
- 再开气路：12通道和192的开关都在机器左侧，三个都开
- 开总阀：开总阀前需检查减压阀处于关闭状态（即拧松状态）。拧松气瓶总阀（直立的阀），使气体能够从瓶内出来。这一步需要多拧几下（至少2/3圈，感到阻力消失），不然气瓶有可能并没有真正打开。
- 再缓慢拧紧减压阀，释放气体进入仪器；观察到仪器上的示数和气瓶表上的压力时停止（同时需要确定出气压力为0.2），拧紧减压阀时速度应尽量缓慢，防止过多气体进入机器内导致压力过大。升压容易降压难，同时过大的压力还有可能损害管路。
关机时
- 关气瓶：先拧紧气瓶总阀。再拧松减压阀
- 关左侧的三个气路与仪器总开关
- 12通道建议关闭侧面的电脑；192开机太慢所以不关机，调到睡眠状态即可。
调节瓶压与负压
12通道有时会出现总压压力适宜但是瓶压不合适的情况，但是需要明确的是：调压阀一般不需要调，如有变化，优先检查是否存在气路漏气或温度不合适过高
实在不行，再按以下方案调节调压阀：
- 单体/大瓶试剂的压力过小：逆时针拧瓶压调节阀，速度应该控制缓慢，直到试剂压力合适。
- 单体/大瓶试剂的压力过大：拧松减压阀/顺时针拧瓶压调节阀。完成后放掉单体/大瓶试剂中的气。等待一段时间，直到仪器内压力平衡，直到试剂压力合适。
注：可见压力小偏小，调高容易；压力偏大，调低难。因此拧减压阀时应缓慢。
溶单体
溶单体是及其重要的一步，直接影响合成效率，溶剂需要使用 1.旧的SOL一定确认已加入分子筛 2.新开的SOL
- 目前溶单体都是用192的分支气路，对应的瓶位是192的大瓶试剂的左柜最右侧，标有”SOL”。SOL是含水量更低的wash，化学成分都是乙腈。
- 需使用SOL时，请先打开192合成仪的气瓶阀，减压阀，仪器侧方的总阀和大试剂气压阀
- 换出来的SOL可以加到wash的副瓶或者添加到乙腈洗瓶中，不浪费。
- 溶单体都要加分子筛，加到能覆盖瓶底即可。
- 溶完之后，用的时候都要先打下液，把管路中的旧液体排出来。
基本单体的溶解体积
溶普通单体：固定的注射器，大的那个。 溶修饰单体，一次性的注射器：
- 溶解之前把和空气接触的管路中的乙腈多放点出来
- 可以稍微润洗下注射器
- 小心针头，注意安全，别受伤。针头放利器盒。
- 把单体瓶拧上去时注意别力气太大把螺纹拧歪了，会漏气。
| Base | protection | 1g体积/mL | 5g体积/mL | 浓度(mM) | Company |
|---|---|---|---|---|---|
| A | Bz | 25 | 125 | 46.62 | HJ/QK |
| C | Bz | 25 | 125 | 47.97 | HJ |
| C | Ac(standard) | 27 | 135 | 47.99 | QK |
| EdU | EdU | 34.5 | 172.7 | 38.36 | WHHR |
| G | iBu | 26.5 | 132.6 | 44.90 | HJ |
| G | dmf(fast) | 27 | 135 | 44.90 | QK |
| T | T | 35 | 175 | 38.36 | HJ/QK |
关于特殊单体的溶解
- cy3、Biotin、氨基、BHQ等特殊单体的溶解体积根据需求自定，一般是1g溶20mL。
- 12通道由于瓶位可以直接将单体原瓶怼上去，所以可以直接溶解。安上去时注意安好，不能漏气。
开始合成
- 将空调的出风罩接到除湿机进风口，保证舱内温度。DEB的沸点40℃，温度过高绝对失败。
- 检查废液空间是否够，避免试剂溢出到泵中
- 关舱门，保证温度和湿度效果。
- 192需要检查负压泵的压力示数是否为8(±0.2)。
其他操作
192废液桶排废液
- 如果发现192的废液桶满了，开气瓶，再将三通阀拧180°，再开外接的废液液路，发现紫红色废液流出。
- 废液排空后，先将三通阀拧回180°，待外接液路停止流出时，证明废液桶内气压还原了，此时关闭外接的废液液路。
- 从2023年7月开始，407的废液桶不要摆在实验室中间过道那里，最好还是藏到柜子里面去。
192负压泵调节
负压绝对不能太大，会把废液桶吸瘪，一定注意：
要动这个，应注意是螺丝帽和粥相对滑动，因此：
- 先把里面螺丝帽拧紧点
- 再抓住轴，拧外面的螺丝帽
- 松开看负压变化趋势。
- 重复直到负压在8（±0.2）
氨解
- 开通风，开房间的门（用东西挡一下）避免407负压过大。
- 开氨解仪右侧总开关
- 开正面开关
- 将一整瓶500mL氨水倒入氨解仪。
- 将柱子插板里，上面盖一个罩子防止冷凝水进入柱子。
- 将带柱子的架子放入氨解仪，拧紧锅盖（注意垫片要放好，不然可能会漏气）
- 设置温度和时间。
- 检查快速排气为关；检查侧面的气口为关
- 按下加热，开始氨解。
- 通风和407的门可以关了。